斯氏艾美耳球虫ITS1-5.8S rRNA-ITS2序列的克隆及PCR检测方法的建立

【作者】 闫文朝； 张龙现； 索勋； 薛帮群； 王帅；

【机构】 河南科技大学动物科技学院； 河南农业大学牧医工程学院； 中国农业大学动物医学院；

【摘要】 通过对多种鸡球虫和松鼠球虫18S rRNA和28S rRNA进行序列比对分析,在18S rRNA 3’端和28S rRNA 5’端保守区设计艾美耳属通用引物,以斯氏艾美耳球虫洛阳分离株LY卵囊基因组DNA为模板首次成功克隆到斯氏艾美耳球虫完整的ITS1-5.8S rRNA-ITS2序列,其大小为1178bp,其中ITS1序列长度为423bp,5.8S rRNA为155 bp,ITS2为600 bp,斯氏艾美耳球虫LY株ITS1/2序列高度变异,与鸡球虫、啮齿动物球虫的序列同源性低于60%。然后在斯氏艾美耳球虫ITS1/2序列超变区设计种特异引物,建立了灵敏、特异的PCR.检测方法。本研究结果为兔球虫强致病种的临床诊断和兔球虫早熟弱毒疫苗的纯种筛选提供有效的分子检测工具。更多还原