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柔嫩艾美耳球虫的二氢乳清酸脱氢酶基因的克隆和表达
【作者】 陈佳； 廖申权； 戚南山； 吴彩艳； 吕敏娜； 吴玄光； 孙铭飞；
【机构】 广东省农业科学院兽医研究所； 华南农业大学兽医学院；
【摘要】 二氢乳清酸脱氢酶(Dihydroorotate dehydrogenase,DHODH)是一种含铁的黄素依赖的线粒体酶,是核酸中嘧啶合成的关键酶,催化从头嘧啶生物合成途径中的第四步反应,是该反应途径的关键酶。抑制DHODH,可以阻断新生嘧啶合成,致使DNA合成障碍。由于顶复门原虫等一类低等生物与其宿主的DHODH在分子结构上存在着明显差异,近年来作为研发新型抗顶复门原虫药物的靶标而成为研究的热点。本研究通过生物信息学和比较基因组学技术法,注释了柔嫩艾美尔球虫(E.tenalla)二氢乳清酸脱氢酶(EtDHODH)的基因序列,运用分子生物学技术成功克隆了.EtDHODH的ORF序列(1794bp),编码597个氨基酸,分析显示一段由22个氨基酸组成的跨膜结构域(150-172aa)将蛋白分为胞外和胞内两个肽段。分别构建重组质粒pET32a-EtDHODHⅠ(全长),pET32a-EtDHODHⅡ(胞内)和pET32a-EtDHODHⅢ(胞外),并进行诱导表达,经SDS-PAGE检测,获得重组表达蛋白。本研究结果将为新的抗球虫药物靶标研究打下基础。
【基金】 广东省国际科技合作专项(2008A050200015);广东省自然科学基金项目(1045106001006126);广东省农业科学院院长基金项目(201014,201115);广东省农业科学院兽医研究所所长基金项目
- 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会
- 【会议时间】2011-11-18
- 【会议地点】中国湖北武汉
- 【分类号】S852.723
- 【主办单位】中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会