柔嫩艾美耳球虫杨凌株RB1-a基因的克隆表达与免疫保护性试验

【作者】 彭维刚； 于三科； 黄妮； 胡冰； 林青； 宋军科；

【机构】 西北农林科技大学动物医学院；

【摘要】 【目的】对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)杨凌株RB1-a基因进行克隆与表达,检测表达产物的免疫保护性,为鸡球虫的基因工程疫苗的研制奠定基础。【方法】以纯化的E.tenella杨凌株孢子化卵囊的总.RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出其RB1-a基因,测序后进行序列分析。然后将RB1-a基因N端不含信号肽序列克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建pET-32a-RB1-a重组质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出重组蛋白,将重组蛋白纯化后免疫雏鸡,对其免疫效果进行评价。【结果】E.tenella RB1-a基因的开放阅读框(ORF)包含618个碱基,编码205个氨基酸,与报道的E.acervulina PAPa46株ORF序列相似性为99.84%,两者推导的氨基酸序列相同。SDS-PAGE分析表明,重组质粒表达产物为42 ku的融合蛋白。各种抗球虫指标的测定结果显示,RB1-a免疫组和RB1-a+佐剂免疫组的相对增重率分别为64.2%和69.4%,卵囊减少率达到37.22%和30.56%,ACI分别为146.2和1.50.4。【结论】RB1-a基因具有很强的保守性,种间差异不大;重组蛋白具有部分免疫保护效果,该研究为鸡球虫基因工程疫苗的研制奠定了基础。更多还原