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牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单抗的制备及鉴定
【作者】 于作； 朱远茂； 高欲燃； 董秀梅； 吕闯； 薛飞；
【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室；
【摘要】 为了制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究根据GenBank登录的IBRV gE基因序列设计一对特异性引物,扩增出长350 bp的gE基因片段,定向克隆到pET-32a(+)表达载体中,然后转化BL21表达菌,经过IPTG诱导表达,获得了可溶性重组gE蛋白。利用Ni柱亲和层析法纯化重组gE蛋白,免疫印迹试验检测证明其具有良好的抗原性和特异性。以纯化的gE蛋白为免疫原,免疫6周龄～8周龄Balb/c小鼠,免疫3次后,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,利用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,并对其生物学特性进行研究。结果共获得2株能稳定分泌抗gE MAb的杂交瘤细胞,将其命名为1E4和3F11。间接免疫荧光试验表明,2株单抗均可与IBRV/gE+株发生特异性的反应,与IBRV/gE-株不反应。这些MAb的研制为IBRV gE缺失标记疫苗株和自然感染株的鉴别诊断提供了物质基础。
【关键词】 牛传染性鼻气管炎病毒；
gE基因；
单克隆抗体；
【基金】 国家863计划(2006AA10A204)
- 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会
- 【会议时间】2010-08-01
- 【会议地点】中国黑龙江哈尔滨
- 【分类号】S852.65
- 【主办单位】中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会、中国免疫学会兽医免疫分会