表达FMDV Asia 1 VP1基因重组BHV-1的构建

【作者】 朱远茂； 高欲燃； 于作； 董秀梅； 吕闯； 薛飞；

【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室；

【摘要】 为了构建表达FMDV Asia1（Asia1 IND 49197）VP1重组BHV-1,首先人工合VP1全基因并引入限制性内切酶XabⅠ和KpnⅠ,通过酶切连接等生物学方法用VP1基因替换本实验室前期构建好的转移载体pGEMT-gE-/LacZ⁺LacZ基因,从而构建获得含有巨细胞病毒（Cytomegalovirus,CMV）早期启动子和BGH PolyA调节信号及VP1的完整表达盒同时含有BHV-1同源重组上下游臂的转移载体。采用磷酸钙介导转染法将该转移载体与前期获得的gE基因缺失并表达LacZ基因的重组病毒rBHV-1/gE-/LacZ⁺基因组DNA共转染牛鼻甲细胞,采通过反向病毒蚀斑筛选,获得表达VP1基因的重组病毒rBHV-1/gE-/AsiaVP1。PCR鉴定结果表明VP1基因成功重组到rBHV-1/gE-/AsiaVP1基因组中,间接免疫荧光试验和Western blot证实VP1基因在rBHV-1/gE-/AsiaVP1感染的细胞中获得了表达。在MDBK细胞中连续传25代,PCR鉴定结果表明VP1基因在rBHV-1/gE-/AsiaVP1中稳定存在。rBHV-1/gE-/AsiaVP1与亲本病毒rBHV-1/gE-/LacZ⁺的TCID₅₀测定结果分别是10^8.43/mL、10^8.33/mL,表明他们之间的增殖能力相似。更多还原