节点文献
猪趋化因子CXCL12的克隆与真核表达
【机构】 山东农业大学动物科技与动物医学院；
【摘要】 为研究猪CXCL12的生物学功能,采用RT-PCR的方法从猪脾脏组织中扩增猪CXCL12基因的cDNA,构建真核表达载体pcDNA3.1-CXCL12,再转染至HEK293FT细胞后,24 h后经间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测CXCL12的表达,用镍柱纯化表达的6×HIS-CXCL12融合蛋白并用体外趋化小室实验检测纯化的CXCL12蛋白对猪(Sus scrofa)外周血单个核细胞,大鼠(Rattus norvegicus)和小鼠(Mus musculus)的脾脏单个核细胞以及人(Homo sapiens)淋巴细胞H9细胞系趋化能力。结果显示,双酶切鉴定和核酸序列分析证实pcDNA3.1-CXCL12真核表达质粒构建成功,转染HEK 293FT细胞后,IFA能够检测到CXCL12蛋白的表达,western blot显示表达的融合蛋白分子量约为17 ku,纯化的6×HIS-CXCL12融合蛋白对猪外周血单个核细胞具有趋化活性,而对其他细胞无趋化活性。
【关键词】 chemokine(c-x-c motif)ligand 12；
真核表达；
趋化活性；
- 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会
- 【会议时间】2010-08-01
- 【会议地点】中国黑龙江哈尔滨
- 【分类号】S858.28
- 【主办单位】中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会、中国免疫学会兽医免疫分会