鸡奇异变形杆菌外膜蛋白的抗血清制备及其荧光标记抗体检测方法的建立

【作者】 朱明华； 朱瑞良； 王慧； 孙寅剑； 马荣德； 谭燕玲； 魏凯； 王新建； 郭文龙；

【机构】 山东农业大学动物科技学院；

【摘要】 为建立鸡奇异变形杆菌(P.mirabilis)直接荧光标记抗体检测方法,本研究采用改良的方法提取了奇异变形杆菌OMP。以该OMP免疫健康新西兰家兔制备兔抗鸡奇异变形杆菌OMP高免血清,制得纯化的IgG,用FITC标记得到兔抗鸡奇异变形杆菌OMP-IgG的荧光标记抗体,建立直接荧光标记抗体检测鸡奇异变形杆菌的方法,应用该方法检测临床样品184份,检测结果与细菌分离法和微量平板凝集比较。结果表明提取的OMP含有6种成分,分子量分别为67.0、63.1、57.5、53.7、43.0、31.6 ku,纯化的IgG重链和轻链分子量分别约为55和23 ku,含量为1.423 mg/mL,经过优化和筛选OMP-IgG荧光标记抗体最佳工作浓度为0.25 mg/mL、最佳感作时间为30 min。临床检测结果显示该方法具有简便、快速、敏感和特异性强等优点,为鸡奇异变形杆菌病的流行病学调查和临床快速诊断提供了技术保障。更多还原