不同蔗糖浓度、供体细胞保存温度和融合温度对小鼠体细胞克隆胚胎发育的影响

【作者】 彭礼繁； 罗光彬； 姜午旗； 闻福安； 任建诚；

【机构】 沈阳农业大学动物胚胎工程实验室；

【摘要】 本试验旨在分析比较不同蔗糖浓度对小鼠卵母细胞去核时间、去核率及重构胚体外发育的影响,并探讨供体细胞的保存温度和融合温度对重构胚体外发育的影响。选用性成熟的雌性昆明小鼠为实验动物,经过超数排卵后得到卵丘卵母细胞复合体(COCs),以卵丘细胞为核供体细胞,卵母细胞为核受体细胞进行核移植试验研究。试验结果表明,各蔗糖浓度组的去核率均达到100%,但3%、4%、5%蔗糖浓度组的平均显微操作时间明显短于0%、1%、2%蔗糖浓度组,而且4%和5%蔗糖浓度组的重构胚发育率均显著低于1%、2%、3%蔗糖浓度组;卵丘细胞保存在室温组的细胞融合率和体外发育率均显著高于高温组(30℃、40℃)、低温组(-5℃、-10℃、-15℃、-20℃)及温度变化组(40～-20℃)(P>0.05);25℃组细胞融合率显著高于37℃组。由此可见,显微操作液中添加3%蔗糖不仅使卵子的核明显,而且大大缩短卵子在体外操作时间,有利于重构胚的体外发育。卵丘细胞的室温保存和室温融合温度更有利于小鼠核移植胚胎的体外发育。更多还原