5-Aza-dc和TSA处理巴马小型猪体细胞对其表观遗传修饰和核移植效果的影响

【作者】 宁淑芳； 李青洋； 梁明明； 杨小淦； 陆阳清； 卢晟盛； 卢克焕；

【机构】 广西亚热带生物资源保护利用重点实验室广西大学动物繁殖研究所；

【摘要】 【目的】探讨5-Aza-dc(5-氮-2-脱氧胞苷,DNA甲基化转移酶抑制剂)和TSA(Trichostatin A,去乙酰化酶抑制剂)对广西巴马小型猪肾脏成纤维细胞表观遗传修饰及核移植胚胎早期发育的影响。【方法】分别用10nM 5-Aza-dc,50nM TSA及二者联合处理巴马香猪肾脏成纤维细胞。(1)用实时定量PCR技术对各个处理组供体细胞的Dnmt1,Dnmt3a,HDAC1,IGF2 mRNA变化情况进行检测;(2)各组供体细胞用抗5-甲基胞嘧啶一抗及FITC二抗结合后,用流式细胞仪进行荧光定量,检测细胞的DNA甲基化水平;(3)用各处理组的体细胞进行核移植,探讨5-Aza-dc和TSA对核移植胚胎早期发育的影响。【结果】(1)5-Aza-dc和TSA联合处理体细胞可显著降低Dnmt 3a,HDAC1的mRNA水平,显著提高IGF2的mRNA水平(P<0.05);5-Aza-dc处理组可显著降低Dnmt1的mRNA水平,显著提高IGF2的mRNA水平(P<0.05);(2)流式细胞仪的检测结果表明,5-Aza-dc和TSA联合处理体细胞可显著降低体细胞的DNA甲基化水平。(3)5-Aza-dc和TSA处理供体细胞,对核移植的融合率和分裂率无显著影响(P>0.05),联合处理组显著提高了核移植胚胎的囊胚率(25.6%vs.16.0%,P<0.05)。【结论】5-Aza-dc和TSA联合处理供体细胞,明显改变了供体细胞的表观遗传特性,并显著提高了核移植胚胎的体外发育能力。更多还原