外源褪黑激素对牛卵母细胞体外成熟和体外受精早期胚胎体外发育的影响

【作者】 高超； 田秀芝； 王梁； 张璐； 徐静； 汪锋； 朱士恩； 曾申明； 田见晖； 张忠诚； 戴蕴平； 刘国世；

【机构】 中国农业大学动物科技学院； 中国农业大学生物学院；

【摘要】 本研究旨在探索不同浓度褪黑素（melatonin,MT）处理对牛体外受精早期胚胎体外发育的影响。放射免疫分析法测得中、小卵泡内MT浓度高于大卵泡,与周围血清中的MT浓度相近,且中小卵泡中雌激素（E₂）浓度显著低于大卵泡。并检测添加不同浓度MT成熟培养后的培养液中MT、E₂、孕酮（P）等激素水平,结果表明:添加10^-11mol/L组的P浓度2.01±0.33a（P<0.05）与对照组有显著性差异,与其他各实验组差异不显著,卵母细胞体外成熟22-24h后体外受精,精卵共孵育10h后CR1aa+3%BSA中培养48h时统计卵裂率,换液至CR1aa+6%FBS培养至8d统计囊胚率、孵化囊胚率和囊胚细胞数。当只在成熟液中添加不同浓度的MT时,与对照组（67.32±7.30%）相比,10^-9mol/LMT组（77.81±7.06%）卵裂率显著提高（P<0.05）;并能提高囊胚率且囊胚细胞数显著高于对照组（90.30±28.74 vs 75.07±25.98,P<0.05）;只在前期培养液中添加MT不影响卵裂率,10^-7mol/L组囊胚率、孵化囊胚率和囊胚细胞数达最好;而在后期培养液中添加MT时,10^-5-10^-11mol/L组之间囊胚率和孵化囊胚率差异不显著,但10-9mol/L组略高且与对照组和10-3mol/L组有显著性差异（35.62±12.55%vs20.14±4.59%,35.62±12.55%vs 18.16±4.70%;45.71±5.08%vs 25.00±16.67%,45.71±5.08%vs 25.00±16.67%,P<0.05）。对MT最佳组合组和对照组的卵母细胞进行FDA、ROS检测及卵裂至2-、4-细胞的胚胎进行ROS检测,结果表明:添加MT组卵母细胞活力明显高于对照组,而ROS浓度低于对照组。这些结果表明,卵母细胞的成熟与褪黑激素相关,并对牛早期胚胎体外发育都有促进作用,可能是MT通过直接清除ROS来实现的。更多还原