牛病毒性腹泻病毒实时定量RT-PCR检测技术的建立及初步应用

【作者】 任艳； 陈创夫； 乔军； 王鹏雁； 盛金良； 王远志； 张沾； 李臻；

【机构】 石河子大学动物科技学院； 石河子大学医学院；

【摘要】 以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的保守基因5’-非编码区为参考,设计、优化一对特异的荧光定量PCR引物,应用Smart CycleⅡ分析系统,结合Eva Green荧光染料结合原理,建立一种快速、定量检测牛病毒性腹泻病毒的荧光定量PCR技术。该方法线形范围为10~1-10~6copies/μL,相关系数为R~2=0.997,扩增效率为E=0.78。灵敏性比常规PCR高10~2倍。该方法具有良好的特异性,检测变异系数低于1%。应用本实验建立的方法检测25份不同地区采集的临床症状疑似BVDV感染的牛粪样品,阳性检出率为72%(18/25),与病毒分离培养和电检观察相比,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能定量检测等优点,为实验室快速、准确检测BVDV奠定了基础。更多还原