环介导等温扩增(LAMP)技术鉴定简单异尖线虫

【作者】 陈信忠； 郑洋妹； 龚艳清；

【机构】 厦门出入境检验检疫局； 福建农林大学动物科学学院；

【摘要】 根据简单异尖线虫ITS保守区域的基因序列设计特异性引物进行环介导等温扩增(LAMP)。对反应体系、反应温度、反应时间等进行优化,用简单异尖线虫ITS序列重组质粒进行灵敏性和特异性试验,并用简单异尖线虫样品进行验证。LAMP的最佳反应体系为0.8 mmol/L dNTPs、10 mmol/L Mg2+、0.8 mmol/L Betaine、0.2μmol/L外引物、1.6μmol/L内引物、8 U Bst DNA聚合酶大片段,反应温度为62℃,反应时间为60 min;检测简单异尖线虫的灵敏度达到10拷贝/μL,对典型异尖线虫、对盲囊线虫、针蛔线虫特异;7份简单异尖线虫样品经LAMP验证均为阳性。表明LAMP方法灵敏性高,特异性强,操作简便,成本低,是鉴定简单异尖线虫的有效手段。更多还原