SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测巴马香猪Toll样受体2 mRNA方法的建立

【作者】 徐汉进； 雍艳红； 巨向红； 赵云涛； 安立龙； 效梅； 许英梅；

【机构】 广东海洋大学动物科学系； 广东海洋大学动物医学系； 广东海洋大学现代生化中心；

【摘要】 基于SYBR GreenⅠ技术的实时荧光定量PCR是目前定量检测核酸比较准确的方法之一。本试验目的是建立SYBR greenⅠ实时荧光定量PCR检测巴马香猪TLR2 mRNA的方法。前腔静脉采血,提取外周血单核细胞RNA,反转录,连接载体后制作成标准品质粒。倍比稀释TLR2标准品质粒,建立PCR标准曲线,同时绘制融解曲线,并进行重复性和精密度评价。结果表明:TLR2标准品质粒的标准曲线符合线性要求,相关系数r~2为0.9996,扩增效率Ex=95%;熔解曲线峰值单一,产物特异度较好。批内CV和批间CV分别为0.98%和2.29%,精密度和重复性较好。标准曲线的线性范围在7.1×10~7～7.1×10~2 copies/μL之间,说明本实验建立的方法能够在较宽范围内对目的基因进行检测。更多还原