放线杆菌外膜蛋白酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活与毒性检测

【作者】 倪宏波； 刘思国； 杜艳芬； 林靖凯； 刘慧芳； 王春来； 司薇； 常月红； 彭玮； 王聃； 赫明雷；

【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室； 黑龙江八一农垦大学动物科技学院；

【摘要】 目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵质粒载体pGBKT7-omp(胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白),并检测其是否具有自身激活及毒性作用.方法:从胸膜肺炎放线杆菌提取基因组DNA,用PCR方法获得omp,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-omp在酵母双杂交系统中的自激活和毒性作用.结果:实验成功构建了诱饵质粒载体pGBKT7-omp,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用.结论:pGBKT7-omp可应用在酵母双杂交系统中,寻找猪肺泡上皮细胞cDNA文库中与omp相互作用的蛋白质,为筛选胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白与肺泡上皮细胞相互作用的蛋白奠定了重要基础。更多还原