猪传染性胃肠炎病毒M蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

【作者】 张小波； 左玉柱； 刘媛； 范京惠； 李潭清； 李建辉； 孙彦新；

【机构】 河北农业大学动物科技学院；

【摘要】 本研究根据GenBank发表的TGEV TS株全基因核苷酸序列,设计了1对用以扩增TGEV主要结构蛋白M基因的特异性引物.利用RT-PCR方法扩增TGEV HB06株M基因,并将其克隆到pMD18-T载体中,进行EcoRI和XhoI双酶切鉴定,将获得的M基因片段定向亚克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中,构建了重组原核表达质粒pGEX-6P-M,转化Rossetta(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导重组菌株表达了融合蛋白.结果表明,从TGEV HB06株扩增得到了M基因片段,该基因全长789 bp,编码262个氨基酸,与TS株、Purdue-115株、TFI株和H16株的M基因同源性分别为97%、99%、96%和97%.SDS-PAGE电泳结果显示,重组表达质粒获得了约56 kDa的目的带,其中M蛋白的分子质量约为30kDa,与预期的结果一致,并且表达产物主要以包涵体的形式存在;Western-blot分析表明,表达的M重组蛋白可以被兔源抗TGEV阳性血清识别;试验结果证明,TGEV的M基因高度保守,在大肠杆菌表达系统内成功表达了TGEV M蛋白.更多还原