猪细小病毒(PPV)SD1株NS1基因的克隆与原核表达

【作者】 谢金文； 沈志强； 王金良； 任艳玲； 管宇； 苗立中；

【机构】 山东省畜禽用蜂胶疫苗工程技术研究中心； 山东省滨州畜牧兽医研究院；

【摘要】 设计合成1对PCR引物,应用PCR技术扩增出猪细小病毒SD1株NS1基因全序列,并将其克隆到pMD18-T载体中进行序列测定和分析.结果表明,测得结果与已发表的登录号为AY583318、AY684866、D00623、DQ675456、M38367和U44978的猪细小病毒相应基因序列核苷酸的同源性分别为99.4%、98.6%、97.3%、98.8%、98.9%和98.7%,表明NS1基因具有高度保守性.进一步插入到原核表达载体中,并将构建的pET 30a/NS1转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导培养,提取的蛋白质经SDS-PAGE电泳,获得分子量约为86kDa的蛋白带,结果表明,所克隆的猪细小病毒NS1基因在原核细胞中得到表达,主要存在于包涵体中.更多还原