节点文献
抗人红细胞单链抗体与猪瘟E2蛋白双功能融合 蛋白的构建及生物学活性检测
【作者】 覃绍敏； 白安斌； 吴健敏； 廖文军； 袁书智； 华俊； 关忠谊；
【机构】 广西兽医研究所； 惠朋动物药业有限责任公司；
【摘要】 为构建既具有凝集性又具有抗原性的双功能融合蛋白,本研究以重组质粒PMD-2E8ScFv和PETmE2为模板,应用PCR方法分别扩增出目的基因2E8ScFv(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和mE2(猪瘟E2蛋白主要抗原编码区基因).采用重叠延伸(SOE)PCR的方法将2E8ScFv和mE2拼接成融合基因2E8mE2,经测序正确后,将2E8mE2亚克隆入PET-DsbA原核表达载体,经PCR和酶切鉴定,表明重组表达质粒PET-DsbA-2E8mE2构建成功.将该重组表达质粒转化入宿主菌BL21(DE3)PlysS中,用IPTG进行诱导表达,表达的融合蛋白经SDS-PAGE电泳、免疫印迹和BandScan软件分析.结果表明:2E8mE2融合基因在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物大部分以不溶的包涵体形式存在,分子量约为65KDa,与预期的大小一致;融合蛋白的表达量约占菌体总量的30%左右.Western-blotting与红细胞凝集试验证实:2E8mE2融合蛋白既能够与人红细胞结合,又能够与CSFV抗体反应,具有双功能特性。
【基金】 广西科技攻关与新产品试制项目(NO.桂科攻0632002-1-2);广西水产畜牧兽医局科研计划项目(NO.桂鱼牧计涵[2006]19)资助
- 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（上册）
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会
- 【会议时间】2009-09-01
- 【会议地点】中国广西南宁
- 【分类号】S854.43
- 【主办单位】中国畜牧兽医学会动物传染病学分会(Branch of Animal Infectious Diseases,CAAV)