猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立

【作者】 蒋大良； 余兴龙； 李润成； 葛猛； 颜爱； 李杰； 刘春红； 刘俊琦；

【机构】 湖南农业大学动物医学院；

【摘要】 采用PCR方法从猪瘟病毒兔化弱毒(Hog Cholera Lapinized Virus HCLV)疫苗株cDNA中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,将其克隆进原核表达载体pET32a(+),构建重组原核表达载体pET-NS3.将pET-NS3转化进大肠杆菌Rosetta(DE3)进行优化表达,采用SDS-PAGE分析NS3融合蛋白主要以包含体形式表达,分子大小约95 kD.Western Blotting分析表明NS3融合蛋白具有免疫原性.采用Ni~+亲和层析方法纯化得到NS3融合蛋白(90%).以纯化的NS3融合蛋白为抗原初步建立了检测CSFV NS3抗体的间接ELISA方法,对221份不同猪群和年龄的猪血清样品进行检测.将检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果进行对比,结果阳性符合率为83.33%,阴性符合率为89.38%,总符合率为86.43%.实验结果表明:重组原核表达载体pET-NS3构建成功,NS3融合蛋白在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功地表达,建立的间接ELISA检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果有较高一致性.更多还原