【作者】 张丽艳； 刘光远； 田占成； 谢俊仁； 龚真莉； 刘建刚；

【机构】 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室；

【摘要】 目的对长角血蜱饥饿雌性成蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选得到H105基因,同源性比对发现该基因与青海血蜱Hq05基因同源性为84%,文献表明Hq05表达蛋白对蜱的产卵率及孵化率均有影响。因此本实验以H105为研究对象,确定其对长角血蜱成蜱的保护性,为研制长角血蜱的分子疫苗奠定基础。方法利用5′-RACE技术克隆该基因5′端未知部分序列,从而获得其全长。RT-PCR技术分析其在蜱的不同发育阶段的分布情况。将H105编码区亚克隆后连接到pGEX4T-1原核表达载体上,转化BL21(DE3)宿主菌,经IPIG诱导进行原核表达。用兔抗长角血蜱成蜱全蜱蛋白血清对该表达蛋白进行Western-blot分析,确定其反应原性。结果H105全长为1098bp,包含一个540bp的开放阅读框,编码179个氨基酸残基,预测蛋白分子量为19.69ku.RT-PCR分析发现该基因在长角血蜱的若蜱、成蜱阶段均有表达,而在卵以及幼蜱阶段没有表达。原核表达得到大小为56 ku左右的目的蛋白。与预期大小一致。Western-blot显示兔抗长角血蜱成蜱全虫抗体能够识别该重组表达蛋白。结论H105基因的表达产物具有较好的反应原性,说明其具备成为抗蜱疫苗的潜力。更多还原