【作者】 刘志杰； 侯俊玲； Mohammed A.Bakheit； Diaeldin A.salih； 罗建勋； 殷宏； Jabbar S.Ahmed； Ulrike Seitzer；

【Author】 Mohammed A.Bakheit,Diaeldin A.salih, Jabbar S.Ahmed, Ulrike Seitzer 2.National Research Center for Protozoan Disease,Obihiro University for Agriculture and Veterinary Medicine, Inada-cho,Obihiro,Hokkaido,Japan 3.Division of Veterinary Infection Biology and Immunology,Research Center Borstel,Germany)

【机构】 中国农业科学院兰州兽医研究所国家兽医病原生物学重点实验室,甘肃省兽医寄生虫病重点实验室； Division of Veterinary Infection Biology and Immunology,Research Center Borstel,Germany； National Research Center for Protozoan Disease,Obihiro University for Agriculture and Veterinary Medicine,Inada-cho,Obihiro,Hokkaido,Japan； 中国农业科学院兰州兽医研究所,国家兽医病原生物学重点实验室,甘肃省兽医寄生虫病重点实验室；

【摘要】 成环恒温扩增方法(LAMP)是一个新型的核酸检测方法,该方法需要两对或三对引物与目标DNA模板结合,在恒温条件下反应,这一方法具有高效,敏感和特异等特点。本研究中,我们以引起我国羊泰勒虫病的病原尤氏泰勒虫(Theileria uilenbergi)和吕氏泰勒虫(T.luwenshuni)同源基因(UTRu6,UTRlu8)的保守区为模板,设计了LAMP引物。这组引物能同时扩增这两种病原,反应条件为63摄氏度,反应时间为15分钟。反应产物经EcoRⅠ酶切消化和序列测定证明了反应的特异性,另外,通过测定10倍稀释的DNA样品,证明了该方法具有从0.1皮克DNA样品中扩增到目标基因的敏感性。最后,通过比较LAMP和反向线性应迹法(RLB)测定86份野外样品的结果,确定了LAMP的敏感性和特异性分别为66.0%和97.4%。由于该方法快速,简便,廉价,敏感且特异,所以它将具有对我国羊泰勒虫病的诊断和流行病学调查的潜在应用价值。更多还原