柔嫩艾美耳球虫杨凌株TA4基因的克隆、表达与蛋白结构预测

【作者】 林青； 王卉； 于三科； 战美娜；

【机构】 西北农林科技大学动物医学院；

【摘要】 以纯化的E.tenella YL株的孢子化卵囊的总RNA为模板,根据国外报道的序列设计一对引物,用RT-PCR方法扩增出E.tenella YL虫株的TA4基因。序列分析表明:该序列全长741 bp,开放阅读框(ORF)为651个碱基。共编码217个氨基酸,将该片段登陆GenBank/NCBI进行比较,发现与报道的E.tenella HT和E.tenella BJ、E.tenella ZJ株的TA4基因ORF序列同源性分别为99.8%和99.8%、99.27%。该基因与报道的E.tenella HT和E.tenella BJ、E.tenella ZJ株的TA4基因推导的氨基酸序列同源性均为99.4%、99.4%、98.8%。由此确定所获得的目的基因为E.tenella YL TA4基因。利用生物信息学和分子生物学软件对TA4基因编码的蛋白进行结构预测,结果表明,该蛋白为一结构松散的球状蛋白。将TA4基因克隆到表达载体pET-32a,构建pET-TA4重组质粒并在大肠杆菌BL21中进行表达,表达产物经SDS-PAGE分析,表明成功的表达出了分子量为41ku的融合蛋白。该研究为球虫基因工程疫苗的研制奠定了基础。更多还原