四川山地乌骨鸡IL-1β真核表达质粒构建及对IBV DNA疫苗免疫佐剂效应研究

【作者】 徐永莉； 王红宁； 黄勇； 张毅； 余协中； 唐梦君； 鲜凌谨； 向青； 封浪； 叶满玉； 刘蕊娜；

【机构】 四川农业大学动物科技学院； 四川大学"985工程"西南资源环境与灾害防治科技创新平台,四川大学生命科学学院,四川大学动物疾病防控生物工程研究中心；

【摘要】 根据Genebank上鸡IL-1β序列(Y15006)设计引物对,采用RT-PCR法从四川山地乌骨鸡的外周血淋巴细胞RNA中克隆ChIL-1β基因,将其克隆到PMD18-T载体测定序列,双酶切后,插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达质粒研制出分子佐剂pDNAIL-1β。通过间接ELISA测定其特异性抗体和流式细胞技术检测CD4+、CD8+T淋巴细胞发现,联合佐剂组与单独IBV DNA组比较在14-21天期间,出现差异极显著(P<0.01)。攻毒实验发现IBV DNA联合pDNAIL-1β组其保护率(95%)显著高于单独DNA疫苗组(85%),与弱毒苗保护率相当(95%),但低于灭活苗保护率(100%)。结果表明:IBV DNA组主要免疫后期发挥作用,pDNAIL-1β免疫早期发挥重要作用,二者联合使实验鸡体在整个免疫期较长时间内发挥较高免疫水平,pDNAIL-1β可显著增强DNA疫苗免疫作用。更多还原