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应用基因芯片鉴别猪流感病毒亚型方法的建立和初步应用
【机构】 山东澳兰生物工程研究院； 西北农林科技大学；
【摘要】 根据Genbank发表的核酸序列,运用DNAMAN软件,分析流感病毒的HA和NA基因序列间的差异性,分别设计合成流感病毒H1、H3、H9、N1和N2的特异分型引物,并根据A型流感病毒的型特异性基因(M基因),设计了A型流感病毒的通用引物。应用RT-PCR分别扩增各亚型的特异片断,并克隆到pMD18-TSimple Vector构建重组质粒,用于各亚型探针的制备。将各探针按一定的阵列点加到硝酸纤维素膜上,制备成低密度基因芯片。在多重PCR过程中,用生物素标记的dUTP(Bio-11-dUTP)对待检样品进行标记,扩增产物与基因芯片杂交,最后用扫描仪进行读片和分析。对临床疑似病例检测结果表明,该方法可以同时检测待检样品中病毒5种亚型5个基因及A型流感病毒的存在情况,与PCR方法相比,显示了较高的灵敏度和特异性。该方法的建立,为批量样品的检测和猪流感病毒各亚型在猪群中的流行病学调查提供了一种快速、灵敏和高通量的手段。
【基金】 农业部948课题项目(项目编号:2004-Z40)资助
- 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会论文集
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
- 【会议时间】2007-09-20
- 【会议地点】中国江西井冈山
- 【分类号】S858.28
- 【主办单位】解放军军事医学科学院军事兽医研究所、江西省畜牧兽医局