重组马立克氏病病毒CVI988/Rispens的构建

【作者】 刘红梅； 秦爱建； 叶建强； 陈鸿军； 金文杰； 刘岳龙；

【机构】 扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室；

【摘要】 根据Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV)强毒GA株基因序列,设计两对引物,用PCR方法扩增出CVI988/Rispens株的US10及其侧翼序列,分别克隆入pUC18载体中。经测序检测正确后,进一步插入含CMV启动子的EGFP基因表达盒,结果获得了含EGFP报告基因的转移载体质粒pPUC18-US10-EGFP。通过同源重组,成功筛选出表达绿色荧光蛋白的重组病毒rCVI988-EGFP,经传代证明重组rCVI988-EGFP在感染的CEF细胞中能稳定表达绿色荧光蛋白。实验结果表明,本研究构建的重组转移载体质粒正确,US10是MDV复制非必需片段,为进一步利用US10区构建重组MDV多价基因工程疫苗奠定了基础。更多还原