禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中表达的研究

【作者】 余祖华； 王红宁； 周生； 黄勇； 柳萍； 唐梦君； 胡慧琼； 李晓英； 廖娟； 张毅；

【机构】 四川农业大学动物科技学院动物预防医学与生物工程实验室；

【摘要】 本研究根据GenBank已公布的IBV株S1基因序列及pPIC9K酵母表达载体序列,设计一对IBVS1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1566bp,5’端不含信号肽序列,3’端添加了终止密码子的IBVS1基因表达片段。用限制性内切酶SnaBⅠ和NotⅠ将S1基因和载体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1。用限制性内切酶BglⅡ将表达质粒pPIC9K-S1线性化,然后用电转化的方法导入毕赤酵母GS115,在MD平板上生长的转化子经过PCR鉴定和表型筛选后,获得了整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1His+Muts。将重组菌株在1%的甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot分析,结果表明,IBVS1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76KD,能与IBV阳性血清特异性结合,表达的蛋白占上清中总蛋白量的12.5%。本研究表达的IBVS 1蛋白可作为制备IB诊断抗原、基因工程疫苗的基础材料,对IB的诊断防治有重要的学术价值和应用价值。更多还原