H5N1亚型HPAIV人工感染家猫和小鼠的初步研究

【作者】 夏咸柱； 高玉伟； 杨松涛； 邹啸环； 常爽； 赵宏霞； 段铭； 岳玉环；

【机构】 军事医学科学院11所； 吉林大学畜牧兽医学院； 吉林大学第一医院儿科； 军事医学科学院2所；

【摘要】 WHO已经确认,H5N1亚型高致病性禽流感病毒HPAIV已经跨越种间屏障,可以使人类感染发病甚至死亡。为给人类该病毒感染建立动物模型,本研究应用经SPF鸡胚增殖的虎源HPAIVA/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)株,其对MDCK细胞的TCID50为10-8/0.1ml。分别经气管和鼻腔接种家猫和小鼠,进行该病毒的家猫和小鼠的初步人工感染实验。实验于BSLⅢ动物实验室中进行,观察期为21天。实验结果如下:1、家猫人工感染实验:选取对该病毒HI抗体小于1:2的3月龄健康家猫6只,随机分为A、B两组,每组3只。A组为实验组,每猫气管内注射该病毒的稀释液1ml,含毒量为106个TCID50;B组为对照组,每猫气管内注射PBS1ml。结果:实验组的3只家猫于实验的第3~4天,开始出现精神沉郁,食欲下降和体温升高,并分别于第7和第10天各病死1只,余下1只耐过。尸检发现肺表面有大片暗红色实变灶;病理组织学光镜观察,见有弥漫性肺泡损伤,肺泡腔内有较多量巨噬细胞浸润和少量蛋白样浆液渗出;用所制备的该病毒单克隆抗体和生物素标的山羊抗小鼠二抗,进行死猫肺标本的免疫组织化学染色,结果在支气管上皮细胞和少数肺泡巨噬细胞的胞浆中见到该病毒的抗原阳性染色颗粒;用SPF鸡胚从2只死亡猫肺标本中均分离回收到了所接种的HPAIV;在耐过康复猫血清中,检出1:32的该病毒HI抗体,而3只对照猫始终未见异常。2、小鼠人工感染实验结果:取18-20克普通1级雄性昆明小鼠55只,随机分成11组,每组5只,第1-10组为实验组,经乙醚麻醉后,分别滴鼻接种10-1-10-10的该病毒稀释液50ul/只,于P3实验室的负压隔离器中隔离饲养观察。结果:第1-6组实验小鼠,从实验的第2-3天,开始出现食欲减少,体重下降,至第5-6天出现死亡;第7、8组实验小鼠部分死亡,体重下降不明显,第9-10组小鼠无1例死亡,体重持续增加。死亡小组用Reed-Muench法计算,其LD50为10-7.25/0.05ml;尸检第1-7组实验小鼠肺炎病变严重,肺指数(肺重/体重)达2-3%,病理组织学光镜观察,肺泡间隔增宽,肺泡腔内有较多量的炎性细胞和蛋白样浆液渗出;用H5N1亚型HPAIV单克隆抗体和生物素标山羊抗小鼠二抗做死亡小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑免疫组织化学染色,结果在其肺和肾标本中发现该病毒抗原阳性染色颗粒;分别用ICAM-1/CD18/CD11b的单抗和生物素标记的山羊抗小鼠二抗做死亡小鼠肺的ICAM-1及其受体的免疫组织化学检查,结果发现其表达与肺炎病变呈正相关。在肺的超薄切片标本中,在透射电子显微镜下,于小鼠肺泡扁平上皮细胞表面和肺泡腔中发现流感病毒样颗粒。用SPF鸡胚从死亡小鼠的肺、脑标本中分离到了所接种的HPAIV;在第7、8组耐过小鼠和第9-10组小鼠血清中,检出1:2-8的该病毒HI抗体。对照组小鼠始终未见异常,体重持续增加,血清HI抗体均小于1:2。上述试验初步表明,H5N1亚型HPAIV可感染家猫和小鼠,这两种动物可用于该病毒的动物模型研究。更多还原