不同引物RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的比较研究

【作者】 邓雨修； 李玉峰； 姜平； 蒋文明； 汤景元；

【机构】 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室；

【摘要】 本研究用3对分别针对PRRSV的ORF7、ORF5和ORF5的PCR引物N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2进行RT-PCR,检测PRRSV,从其敏感性、特异性和临床样品检出率等方面进行比较,在此基础上进一步建立一步法RT-PCR检测方法。结果为:3对引物对PRRSV均有很高的特异性;N1/N2引物PCR最低病毒检测量为7.9TCID50、而AdGP5.1/AdGP5.2引物和RFLP5.1/RFLP5.2引物PCR最低检测量为79TCID50;运用N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物分别进行RT-PCR扩增检测临床样品,PRRSV阳性率分别为58.33%(28/48)、56.25%(27/48)和52.08%(25/48),且用AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物检测的阳性样品,用N1/N2引物检测也都呈阳性。运用N1/N2引物,通过一步法RT-PCR成功地从PRRSV S1株中扩增出374bp的目的基因片段。结果表明,用N1/N2引物扩增PRRSV目的基因,其敏感性和样品检出率更高,更适合临床样品PRRSV的检测。更多还原