秋蜜葡萄叶片病毒检测及GYSVd1群体分析

【作者】 范旭东； 董雅凤； 张尊平； 任芳；

【机构】 中国农业科学院果树研究所国家落叶果树脱毒中心；

【摘要】 对黄斑症状的秋蜜葡萄（V.vinifera-V.labrusca）叶片进行RT-PCR检测,结果表明,该样品带有扇叶病毒（grapevine fanleaf virus,GFLV）和葡萄黄斑类病毒1（Grapevine yellow speckle viroid1,GYSVd1）,而未发现葡萄黄斑类病毒2（Grapevine yellow speckle viroid2,GYSVd2）和葡萄斑点病毒（Grapevine fleck virus,GFKV）。采用GYSVd1引物的PCR产物对该样品进行SSCP及测序分析,带型一致和测序结果完全相同的变种较多,优势变种占29.2%。而采用GYSVd1和GYSVd2兼并引物PCR产物进行单链构象多态性（SSCP）和测序分析,结果显示带型复杂,80%的变种不具有相同带型和核苷酸序列。变种之间相似性在95.2%～99.7%,在P（Pathogenic）区,T1和T2区,C区,及V区均有差异,整体看变异最大区为P区。其中1、3、5、14、16、21序列P区具有相同的变异仅为U³¹⁸→A,占所有变种的26.1%。其余变种在P区均发生变异A³⁰⁶→U、C³⁰⁸→A、G³¹⁰→C,占所有变种的73.9%。2、6、22、24、10、18、26、29在P区同时发生变异AA^60-61→AGA、G⁶²→A、A⁷¹→C,A³⁰⁶→U、C³⁰⁸→A、G³¹⁰→C,占所有变种的34.8%。2、6、22、24、10变种在P区发生变异AA^60-61→AGA、G⁶²→A、A⁷¹→C,A³⁰⁶→U、A³⁰⁷→G、C³⁰⁸→A、A³¹¹→U、G³¹⁰→C,占所有变种的21.7%。所有测序结果提交至GeneBank上,登录号为JF746171～JF746193。通过国内外GYSVd1序列比较发现,P区具有发生频率较高的变异位点,并有一定的规律性。从黄斑症状的秋蜜葡萄中分离出变种2、6、22、24、10在P区发生变异AA^60-61→AGA、G⁶²→A、A⁷¹→C,A³⁰⁶→U、A³⁰⁷→G、C³⁰⁸→A、A³¹¹→U、G³¹⁰→C,目前国内外已知序列中仅有GYSVd1 TypeⅡ澳大利亚分离物Z17225和日本分离物AB028466有上述同样的变异。18、26、29变种P区发生变异AA^60-61→AGA、G⁶²→A、A⁷¹→C,A³⁰⁶→U、C³⁰⁸→A、G³¹⁰→C,是上述变异的一部分。而9、12、15、23、30、28、北京分离物DQ371474～DQ371476、新疆分离物DQ371477、德国分离物Type-ⅠP区仅发生了A³⁰⁶→U、C³⁰⁸→A、G³¹⁰→C,均未发生变异AA^60-61→AGA、G⁶²→A、A⁷¹→C。其他分离物P区基本一致,有较小的变异。本研究主要对可能造成该样品产生黄斑症状的葡萄病毒进行了检测,对其中的GYSVd1种群特点进行分析,获得了一些新的GYSVd1变种,尤其是变种2、6、22、24、10与GYSVd1 TypeⅡP区变异极为相似。但该种群模式与GFLV共侵染的特点、寄主表现黄斑的关系以及哪些变种在致病性起主导地位仍然需要进一步的研究才能得知。更多还原