Cry1Ab敏感和抗性亚洲玉米螟HSP 70蛋白基因的克隆及序列分析

【作者】 杨旭； 李宁； 王振营； 杨群芳； 何康来；

【机构】 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室； 四川农业大学农学院；

【摘要】 通过蛋白质组学等技术发现热激蛋白HSP 70(heat shock protein 70)是Cry 1Ab等Bt毒素在亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenee)幼虫中肠上新的受体蛋白。为了研究和探索Hsp70与亚洲玉米螟对Bt抗性产生的关系,本文采用RT-PCR和RACE技术,克隆了亚洲玉米螟幼虫中肠上热激蛋白HSP 70基因家族的一个成员Ofhsp70的cDNA全长序列,并对Bt敏感种群(ACB-BtS)和Cry1Ab抗性种群(ACB-AbR)的序列差异进行了分析。亚洲玉米螟幼虫中肠上Ofhsp70的cDNA序列全长2 169bp,开放阅读框1 962bp,编码653个氨基酸,分子量计算值为71.36kDa,理论等电点是5.09。该序列包含Hsp70家族3个签名序列,分别是IDLGTFYS、IFDLGGGTFDVSIL和IVLVGGSTRIPKVQK。还发现了Hsp70家族4个真核细胞特征序列:ATP-GTP的结合位点(AEAYLGKT);非细胞器基序(RARFEEL);核定位标签(KRKYKKDLTYNKRALRRL和KRALRRLRTACERAKRTL)以及胞质Hsp70特征基序(EEVD)。此外该基因还存在两个糖基化位点NKSI和NVSA,靠近C末端存在两个GGMP肽序列。亚洲玉米螟对Cry1Ab敏感和抗性种群间Hsp70基因核苷酸序列的一致性为99.24%,氨基酸序列的一致性为100%,抗性种群共有15个碱基突变,而氨基酸没有突变。Bt敏感和Cry1Ab抗性亚洲玉米螟品系幼虫中肠上Ofhsp70的cDNA序列已提交GenBank,分别是HQ434763和JF708083。更多还原