由草莓植原体候选种引起的马铃薯新病害

【作者】 张磊； Mingying Cheng； 董家红； 唐世文； 闵康； 尹跃艳； Jenifer H McBeath； 张仲凯；

【机构】 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所； 云南省农业生物技术重点实验室； University of Alaska,Fairbanks,Alaska 99775-7200,USA； 云南省农业科学院高山经济植物研究所；

【摘要】 植原体(Phytoplasma)病害是一类重要的植物病害,我国已报道由植原体引起的病害多达70多种,其中一些给经济作物带来严重为害,如甘薯丛枝病、槟榔黄化病、桑黄化型矮缩病、枣疯病等。国际上曾报道由植原体引起的马铃薯丛枝病和翠菊黄化病,我国黑龙江、山东曾报道马铃薯丛枝病。近年来,云南不同马铃薯产区不同品种上发现顶叶发紫、变小,植株呈萎蔫症状,部分植株在分枝处有气生块茎,地下部分块茎变小,类似于马铃薯紫顶萎蔫病的病害。该病害可通过块茎传播,在冬早春反季节种植区表现为紫顶萎蔫、植株严重矮化。通过连续多年调查,该病害有发生蔓延的趋势,在迪庆、曲靖大春马铃薯产区和玉溪、红河秋冬早春马铃薯产区均有发生。为了进一步明确其病原,应用16S rDNA引物对病样分离物进行了PCR扩增及测序分析。样品总DNA的提取参考罗大全等的方法进行,根据Lee等(1998)文献设计扩增植原体16S rDNA序列的引物对,以P1/Tint作为第一引物对(Smart,1996),以R16F2/R16R2作为第二引物对进行巢式PCR(nested-PCR)扩增。引物对序列如下:P1:5′-AAGAGTTT GATCCTGGCTCAG GATT-3′,Tint:5′-TCAGGC GTGTGCTCTAAC CAGC-3′;R16F2:5′-ACGACTGCTAAGACT-3′,R16R2:5′-TGACGGGCGGTGTGTA CAAACCCCG-3′。巢式PCR扩增出大小约1 200bp的片段,回收该片段并测序。在GenBank上利用Blastn对所获得的序列进行相似性比对分析,发现该片段与Genbank上的草莓植原体候选种(Candidatus Phytoplasma fragariae)(注册号为EF015582)的16SrDNA相似性最高,为99%,利用计算机模拟的RFLP分析获得的DNA片段,获得的限制性片段图谱与该候选种相一致。按照植原体新的分类方法,该分离物应属于草莓植原体候选种,经查阅国内外相关文献,该病害是一种由植原体引起的马铃薯新病害。更多还原