【作者】 喻其林； 王慧； 徐宁； 程欣欣； 邢来君； 李明春；

【Author】 YU Qi-Lin WANG Hui XU Ning CHENG Xin-Xin XING Lai-Jun LI Ming-Chun~* (Key Laboratory of Molecular and Technology,Ministry of Education,Department of Microbiology,Nankai University,Tianjin 300071,China)

【机构】 南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室；

【摘要】 随着临床上白念珠菌感染率和致死率的不断上升,以及菌株耐药性问题的日益突出,影响白念珠菌毒力及耐药性的关键因子成为目前的研究热点。内质网在真菌细胞分泌蛋白、膜蛋白、膜脂及细胞壁的合成、细胞极性生长等过程中均发挥重要作用,而内质网的钙稳态是内质网功能得以正常发挥的基础。在酿酒酵母中,内质网膜P-型ATPase Cod1/Spf1对内质网钙稳态的维持起重要作用,该蛋白的缺失干扰内质网的功能,引起细胞UPR(非折叠蛋白应答)的组成型激活。我们通过Blast分析,在白念珠菌基因库中搜索到了酿酒酵母Cod1/Spf1的同源蛋白,将其命名为CaCod1。TMHMM分析表明,该蛋白是一个具有10个跨膜区的膜蛋白。我们采用两步同源重组法敲除CaCod1,并通过PCR及Southern blotting技术对敲除菌株CaCod1-/-进行了验证;采用棋盘法对其进行药物敏感性测定,发现与野生型菌株相比,CaCod1-/-菌株对氟康唑、潮霉素B及EGTA等均表现出高度敏感。同时,我们采用一系列菌丝诱导条件,研究CaCod1缺失对白念珠菌菌丝型生长的影响,发现在血清诱导、SLAD与Spider平板上,以及在添加血清的YPD液体培养基中,CaCod1-/-菌株均丧失菌丝型生长能力。通过构建整合有钙应答基因CCH1与报告基因LacZ融合质粒的CaCod1缺失菌株,并测定β-半乳糖苷酶活性,发现该蛋白的缺失引起CCH1基因表达量的显著上调,说明CaCod1的功能与细胞钙稳态有关,其缺失引起胞质钙水平的升高。我们的研究结果表明,CaCod1在白念珠菌耐药性、菌丝型生长及细胞钙稳态等方面均发挥重要作用,这对开发新的抗白念珠菌药物具有指导意义。更多还原