【作者】 陈昌胜； 黄峰； 程兰； 冯春刚； 黄涛江； 李红叶；

【Author】 CHEN Chang-Sheng~1 HUANG Feng~1 CHENG Lan~2 FENG Chun-Gang~2 HUANG Tao-Jiang~3 LI Hong-Ye~1 (1 Institute of Biotechnology,Zhejiang University,Hangzhou Zhejiang 310058,China;2 Agricultural Bureau of Wanzhou City,Wanzhou Zhongqing 404000,China;3 Navel Orange Research Institute of Fengjie County of Zhongqing,Fengjie 404600,China)

【机构】 浙江大学生物技术研究所； 重庆万州区农业局； 重庆奉节县脐橙研究所；

【摘要】 红橘（Citrus reticulata Blanco CV.Hongjv）是重庆万州最具优势的地方特色品种和库区移民的重要经济来源。自2007年以来,红橘园区发生一种过去未曾重视过的病害,并且逐年加重、发病面积在不断扩大,因受害叶片、新梢和果实产生褐色病斑,故暂定褐斑病。病害最初被诊断为炭疽病和黑星病,但使用多菌灵、甲基硫菌灵、苯醚甲环唑、烯唑醇等杀菌剂防治效果均不理想,给病害的防治带来较大的困难（程兰,未发表）。为明确其病原,本研究从病区多个果园采集发病的叶片、果实和枝梢,检查和分离培养发现病组织中广泛存在链格孢菌（Alternaria）和炭疽菌（Colletotrichum）。其中发现的链格孢属真菌分生孢子梗单生或数根簇生,直立或顶端微弯曲,有分隔,但不分枝,色泽从基部到顶部由深褐色渐变淡褐色。分生孢子单生或短链生,倒棍棒形,倒梨形或近椭圆形,淡褐色至褐色,具纵横隔膜,大小为（6.92～13.9）μm×（24.1～44.8）μm,平均10.9×31.6μm。喙柱状或锥状。对材料进行单胞分离和组织分离获得19个链格孢菌株,菌株在PDA培养基上菌落呈灰色至橄榄色或青褐色,平均生长速率11.5mm/d,培养10天即可发现链格孢的分生孢子梗和分省孢子,与自然病斑上产生的基本一致。各菌株的菌落特征,分生孢子梗和分生孢子形状和大小没有显著区别。选取链格孢代表菌株MDB1（来自枝条）和WZF13（来自果实）,炭疽菌株WZ11进行接种。结果显示,利用菌株MDB1和WZF13的菌丝块接种椪柑（C.reticulata Blanco C V.Pankon）叶片的发病率都为66.7%,接种幼果的发病率为0和25%;而利用其孢子液接种椪柑叶片的发病率分别为75%和100%,接种椪柑幼果的发病率都为87.5%。使用炭疽菌株WZ11分别接种椪柑叶片和幼果都不能导致其发病。根据Peever等人（2004）的研究,链格孢菌的多聚半乳糖醛酸酶基因部分序列可作为小孢子型链格孢菌种的分类鉴定的分子依据。为进一步明确万州红橘褐斑病菌是否由交链格孢菌（A.alternata）引起,本研究合成了扩增链格孢菌的多聚半乳糖醛酸酶基因部分序列的兼并引物PG₃和PG₂,PCR扩增获得约465bp片段序列,在http://www.ncbi.nlm.nih.gov数据库中进行比对,发现该序列与Peever等人（2004）报道的柑橘褐斑病菌（A.alternata）菌株AC325的多聚半乳糖醛酸酶基因（aapg-1）（登录号:AB047682）的nt978-1442区只存在两个碱基的差异,相似度高达99.86%。因此,结合形态学和培养性状,菌株MDB1和WZF13均为交链格孢菌A.alternate（Fr.）Keissler（2001,2003）,其基因登录号分别为HQ641564和HQ641565。病原性质的确定将为红橘褐斑病发生规律的研究和控制奠定基础。更多还原