抗肿瘤植物内生菌的筛选及菌株PF09005的分类鉴定与发酵优化

【作者】 黄惠琴； 陈传文； 孙前光； 朱军； 鲍时翔；

【机构】 中国热带农业科学院热带生物技术研究所；

【摘要】 植物内生菌是一个多样性十分丰富的微生物类群,分布于没有外在感染症状的健康植物组织内,并与宿主植物协同进化,其存在和作用长期以来一直为人们所忽视。随着对药用植物内生菌研究的深入,从药用植物内生菌中寻找生物活性成分已成为研究热点。本文研究了海南省长春花、粗榧和见血封喉三种药用植物内生菌的抗肿瘤活性。从三种样品中共分离到内生菌204株,采用MTT法对菌株发酵液进行了抗肿瘤活性的初步筛选。有19株内生菌至少对一种指示瘤株显示了细胞毒活性,占供试菌株总数的9.3 1%。经复筛得到4株活性强且遗传稳定的菌株PA09006、PA09008、PA09009和PF09005。通过菌株PF09005的菌落形态及显微形态特征、培养特征,将菌株PF09005鉴定为指状节丛孢Arthrobotrys dactyloides。实验中还发现,菌株PF09005不仅在菌落形态及显微形态上与A.dactyloides极为相似,而且具有以特殊的菌丝变态形成的捕食器官收缩环,可用于捕杀根结线虫和包囊线虫等。通过发酵优化,确定菌株PF09005最佳发酵培养基成份为:20%土豆汁,葡萄糖2.0%,蔗糖2.0%,酵母膏1.0%,蛋白胨0.5%;最佳发酵条件为:初始pH值7.0,培养温度28℃,500mL三角瓶装液量为200mL,摇床转速为180 r/min,培养时间9d。经过优化,菌株PF09005发酵液对小鼠肉癌细胞S180的抑制率从优化前的83.2%增加到96.1%。更多还原