淀粉样前体蛋白-C端片段对cofilin磷酸化的影响

【作者】 程琳； 陈慧； 许妍姬；

【机构】 延边大学基础医学院预防医学教研部；

【摘要】 目的老年性痴呆患者脑组织除老年斑和神经原纤维缠结之外,还包含Hirano bodies,是由肌动蛋白和其结合蛋白cofilin构成的节状结构,但cofilin-肌动蛋白节状结构形成的具体机制还未阐明。在人非肌型cofilin中,丝氨酸(ser-3)的氨基末端有LIM激酶(LIMK1和LIMK2)磷酸化位点,对ADF/cofilin专一性磷酸化。淀粉样前体蛋白-C端片段(Amyloid Precursor Protein-C Terminal Fragments,APP-CTFs)在AD的发病机制里亦起重要作用。本研究欲探讨APP-CTFs对ADF/cofilin的影响及作用机制。方法APP-CT99-pEGFP转染胎鼠原代皮层细胞,采用细胞免疫组化方法和蛋白印迹实验方法观察磷酸化cofilin和LIMK1的分布形态和表达水平。处理S3肽,LIMK1的特异性竞争性抑制剂后再观察磷酸化cofilin表达。结果细胞免疫组化实验结果,转染APP-CT99-pEGFP的细胞中,磷酸化cofilin和LIMK1在细胞质和细胞核中均有分布,与空载体转染组比较分布较高。S3肽处理后,磷酸化cofilin的表达水平减少。蛋白印迹实验结果,转染APP-CT99-pEGFP的细胞中,磷酸化cofilin和LIMK1蛋白水平增高,与空载体转染组比较具有显著性差异(P<0.05)。S3肽处理后,磷酸化cofilin蛋白水平降低。结论 APP-CTFs通过LIMK1激酶调控cofilin磷酸化。更多还原