兴奋性毒性对神经元胞核内Munc-18蛋白表达分布的影响

【作者】 王丹丹； 张彦平； 许玉霞； 王洪权； 赵红； 赵晓燕； 朱粹青；

【机构】 复旦大学医学神经生物学国家重点实验室,上海医学院神经生物学系；

【摘要】 目的突触囊泡释放中Munc-18蛋白发挥着重要的调节作用。Munc-18基因病理突变可导致癫痫的发生,近年有一篇文献报道在神经元胞核分布有Munc-18并可与DNA片段紧密结合,但是神经系统疾病与神经元胞核内Munc-18分布变化的关系尚不清楚。本实验在明确Munc-18的神经元胞核分布的基础上,探讨了海人藻酸(KA)诱导癫痫动物模型和谷氨酸处理的原代神经元中Munc-18的分布。方法通过免疫电镜、免疫组化和Western Blot等方法观察Munc-18在神经元胞核内的分布,进一步分离神经元胞核并进行不同的处理,免疫荧光染色研究其具体分布状况。以KA诱导癫痫动物模型和经谷氨酸作用的原代培养大鼠神经元为观察对象,通过组织化学和Western Blot等方法研究Munc-18受兴奋性毒性影响后神经元胞核内表达分布的变化。结果 (1)组化方法检测结果显示,Munc-18在动物脑内皮层、海马和丘脑均有分布,尤以海马内分布最明显;(2)神经元胞核内存在较多Munc-18,其中有聚集,呈现出较明显的点状,对提取的神经元胞核进行Western Blot检测,进一步证明Munc-18的存在;另外,神经元胞核内也有p35分布并与Munc-18共存,但CDK5在核内分布不明显。胶质细胞的胞核内Munc-18分布极少或没有;(3)分离的神经元胞核经不同处理后进行荧光染色的结果提示,Munc-18可与DNA结合,部分与核基质结合,而与RNA结合不明显;(4)KA诱导动物癫痫发作可使海马的CA区和齿状回门区与颗粒细胞Munc-18在细胞核内分布显著减少,同时伴有SNAP-25表达量增加;(4)经谷氨酸作用的原代培养神经元胞核中Munc-18分布减少,在胞浆以及神经突起中分布增加,同时也有SNAP-25表达量增加。结论 Munc-18主要在神经元胞核内而非胶质细胞的胞核内分布,Munc-18可与DNA结合,推测其可能参与基因表达的调控;Munc-18的神经元胞核内分布受神经元的兴奋状态调节,经兴奋性毒性影响后Munc-18核内分布减少。更多还原