4.1蛋白家族在不同来源小鼠脑源性NSCs及其分化过程中的表达

【作者】 周贺； 刘素芳； 段萍； 韩雪飞； 许燕； 鄢文海； 邢莹；

【机构】 郑州大学医学院生理学教研室； 郑州大学干细胞中心；

【摘要】 目的观察蛋白4.1家族各成员在正常小鼠和阿尔茨海默病模型鼠来源的小鼠脑源性神经干细胞及其分化过程中的表达情况。方法分离培养新生正常C57小鼠和新生APP转基因阳性和阴性小鼠(阿尔茨海默病模型鼠)脑源性神经干细胞并进行传代;检测nestin的表达以鉴定神经干细胞;进行诱导分化后检测GFAP和NSE的表达以确认分化而来的细胞是否为神经细胞;通过免疫细胞化学方法检测蛋白4.1家族4个成员4.1R、4.1G、4.1N和4.1B在神经细胞分化各阶段的表达情况;通过RT-PCR方法半定量检测在不同来源神经细胞中蛋白4.1家族4个成员mRNA的表达。结果 (1)从新生小鼠脑组织分离的细胞在培养过程中能够形成大量悬浮的克隆球,经免疫细胞化学鉴定,神经球Nestin抗体标记阳性,4.1R、4.1G、4.1N和4.1B,4种蛋白均有阳性表达。(2)分别在三种来源的神经干细胞分化5,10,15天后用免疫细胞化学方法检测4.1R、4.1G、4.1N和4.1B,随着分化时间的延长4种蛋白的表达均有升高。(3)在三种来源的神经干细胞分化15天后用免疫细胞化学方法检测4.1R、4.1G、4.1N和4.1B4种蛋白的表达。APP阳性鼠组中4.1R、4.1G、4.1N和4.1B蛋白的表达均较APP阴性鼠组和正常组为高(P<0.05),APP阴性鼠组和正常组之间4.1R、4.1G、4.1N和4.1B蛋白表达均无显著性差异(P>0.05)。(4)在三种来源的神经干细胞分化15天时检测4.1R、4.1G、4.1N和4.1B的mRNA相对表达量。APP阳性鼠组4.1R、4.1G、4.1N和4.1BmRNA相对表达量均较APP阴性鼠组和正常组为高(P<0.05),APP阴性鼠组和正常组之间4.1R、4.1G、4.1N和4.1B的mRNA相对表达量均无显著性差异(P>0.05)。结论 4.1蛋白家族各成员在不同来源的小鼠脑源性神经干细胞及其分化细胞中均有表达,4.1R、4.1G、4.1N和4.1B在APP阳性鼠来源的神经细胞中表达水平高于正常鼠实验组和APP阴性鼠实验组,提示4.1蛋白可能参与阿兹海默病的发病。更多还原