低氧预适应小鼠脑皮层内与nPKC epsilon相互作用蛋白的鉴定

【作者】 封素娟； 刘旭； 张彩艳； 卜祥宁； 张楠； 梁婧； 杜建丽； 李俊发；

【机构】 首都医科大学神经生物学系 北京神经科学研究所；

【摘要】 目的低氧预适应是一种机体内源性保护机制,指轻度的低氧刺激可诱使组织或细胞对随后发生的重度持续性缺血/低氧产生耐受能力。我们以往的研究表明,蛋白激酶C epsilon(nPKC epsilon)的膜转位激活可能参与了脑HPC的形成,然而究竟哪些蛋白可能与nPKC epsilon相互作用参与该过程,至今仍不清楚。因此,本研究拟鉴定参与低氧预适应过程中小鼠皮层组织内与nPKC epsilon相互作用的蛋白。方法利用免疫共沉淀和双向电泳技术分离正常对照组和低氧预适应组小鼠皮层中与nPKC epsilon相互作用的蛋白;以ImageMaster2DPlatinum软件对2-DE图谱进行差异表达分析;目标蛋白用基质辅助激光解析电离质谱测定肽质量指纹图进行鉴定。结果 (1)双向电泳图谱示,与对照组比较,低氧预适应后与nPKC epsilon相互作用的皮层胞浆成分中有34个蛋白上调,20个蛋白下调,膜相关成分中有27个蛋白上调,28个蛋白下调;(2)结合质谱鉴定发现,低氧预适应后皮层胞浆及膜相关成分中与nPKC epsilon相互作用的热休克蛋白70(HSP70)和14-3-3gamma的蛋白表达量均升高,而膜相关成分中烯醇化酶、突触蛋白2和HSP60的蛋白表达量降低。结论 nPKC epsilon可通过调节HSP60、HSP70和14-3-3gamma等多种与其相互作用的蛋白参与介导低氧预适应的脑保护作用。更多还原