蜜蜂毒肽激活背根节伤害性感受神经元

【作者】 杜意如； 肖勇； 吕卓敏； 丁静； 崔秀玉； 陈军；

【机构】 首都医科大学疼痛生物医学研究所； 第四军医大学疼痛生物医学研究所；

【摘要】 目的研究蜜蜂毒的主要成分-蜜蜂毒肽（melittin）是否对初级感觉神经元有直接激活作用。方法用急性分离的背根神经节细胞,采用全细胞膜片钳和激光共聚焦测钙技术检测蜜蜂毒肽对大鼠背根节神经元的电生理特性和钙瞬变的影响,以及背根节神经元上痛相关受体TRPV1和P2X3的介导作用。结果在电流钳模式下蜜蜂毒肽可以诱发55%（56/102）背根节神经元产生长时程的动作电位发放。主要是小（<30μm）和中等（<40μm）大小的神经元。蜜蜂毒肽诱发的动作电位,在其下降支上有一个明显的"驼峰"（或肩膀）,这是伤害性感受器动作电位表型所特有的特征。观察动作电位发放的时间特性,不同类型的神经元激活产生动作电位发放的时程各不相同,但把56个神经元动作电位发放时程叠加起来,结果可以形成近20分钟的长时程持续。电压钳模式下,蜜蜂毒肽可引起背根节神经元产生内向电流,该内向电流的幅度呈现剂量依赖性。连续给予相同剂量的蜜蜂毒肽可以引起更大幅度的电流。利用激光共聚焦测钙技术,我们发现蜂毒肽可以诱导记录的60%背根节神经元细胞内钙离子浓度([Ca²⁺]_i)的增高。与电生理记录结果符合,对蜜蜂毒肽敏感的神经元主要为中小型细胞。分别加入热伤害性感受器TRPV1受体的阻断剂和ATP之P2X3受体阻断剂能够抑制蜜蜂毒肽在DRG神经上诱发的内向电流和胞内钙离子升高,并阻断动作电位的发放。结论蜜蜂毒肽对初级感觉伤害性感受器神经元有直接的活化作用,该活化作用并不是膜穿孔作用,而是由一些膜蛋白（受体或离子通道）介导的作用。结合动物行为学和在体电生理学的结果,我们得出初步结论,即蜜蜂毒肽在一定剂量范围内对哺乳动物初级感觉伤害性感受器有激活作用,但是直接激活还是间接激活有待进一步研究。更多还原