SNAP29对致密核心大囊泡(LDCVs)释放的调节作用

【作者】 林琳； 杭勤； 朱慧琴； 金建强； 盛祖杭；

【机构】 上海交通大学医学院神经生物学实验室；

【摘要】 目的神经系统中SNARE复合物介导神经递质囊泡在突触前膜的搭靠与融合过程,该复合物的调节一直都是突触传递研究中的热点。SNAP29作为t-SNARE蛋白,参与细胞内SNARE依赖的膜转运过程。我们前期的研究结果显示,SNAP29在神经递质释放过程中是一个负向调节分子,它通过抑制突触囊泡(SV)融合后SNARE复合物的解聚,阻碍SNARE蛋白参与到新的囊泡融合过程中,从而减慢囊泡循环翻新效率,最终对突触传递起到抑制作用。参与突触传递的囊泡有两种,突触囊泡(SV)和致密核心大囊泡(LDCVs)。本研究的目的是观察SNAP29对LDCVs释放的调节作用。方法通过使用FM4-64荧光染料标记囊泡的形态学方法和直接测定囊泡所释放递质的生化方法,观察过表达外源性SNAP29及使用RNAi方法下调内源性SNAP29表达后,PC12细胞中LDCV释放的变化。结果 (1)在PC12细胞中,SNAP29与LDCVs有共定位。(2)SNAP29通过其羧基端)195-257)的卷曲螺旋功能区(coiled-coil domain,CCD)与syntaxin1A结合。(3)在PC12细胞中过表达SNAP29可抑制LDCVs的钙离子依赖性可调控分泌途径的释放。(4)内源性SNAP29表达下调会促进PC12细胞中LDCVs的钙离子依赖性可调控分泌途径的释放。更多还原