镧示踪观察全脑缺血后大鼠大脑皮质及海马CA1区血脑屏障的变化

【作者】 冯志博； 支凌祥； 徐顺利； 杨文亮； 周国民；

【机构】 河南省新乡医学院解剖学教研室； 复旦大学上海医学院解剖与组胚系；

【摘要】 目的探讨脑缺血大鼠大脑皮质和海马CA1区BBB超微结构和通透性的变化规律。方法选用成年健康雄性SD大鼠45只,体重200-350 g,随机分为正常对照组、假手术组和全脑缺血10 min、20 min、30 min组。参照Pulsinelli-B rierley方法制作脑缺血动物模型,并按模型评价标准选择建模成功动物;假手术组仅电凝闭塞双侧椎动脉,不夹闭双侧颈总动脉。(1)组织学观察BBB:到期动物(每组取3只)经2%硝酸镧-2%戊二醛-0.1 mol二甲肿酸钠(镧醛)固定液灌注固定,开颅取脑并立即放入4℃镧醛固定液中,先取左侧大脑项叶皮质和海马内侧段组织,并剪切成1 mm~3组织块;后将组织块和右侧大脑立即分别放入4℃镧醛固定液后固定(4℃过夜)2 h;右侧大脑连续冠状冰冻切片进行尼氏染色,显微镜观察;电镜组织块用含硝酸镧的二甲砷酸钠缓冲液洗涤后,经常规透射电镜标本制片、观察;(2)B B B通透性的评价:到期动物(每组6只)于处死前1 h经尾静脉注入2%伊文氏蓝生理盐水溶液,用4℃生理盐水心内灌注至右心房流出无色液体、断头取左侧大脑称重,并置入体积分数为0.5的三氯乙酸溶液中匀浆、离心,取上清液按1:3比例用无水乙醇稀释,荧光值通过荧光分光光度计测得。绘制标准曲线计算伊文思蓝含量,用每克脑组织含量来表示,统计学分析这些数据。结果 (1)尼氏染色显示单纯脑缺血各组都存在神经元损伤,程度不一,以脑缺血30 min最明显。(2)透射电镜观察:对照组间血脑屏障超微结构无明显变化,其血管内皮细胞形态完整,镧颗粒仅存于毛细血管腔内,沿内皮细胞附着呈线状,没有镧渗出,各部髓鞘结构完整。全脑缺血10 min组可见镧颗粒透入血管内皮细胞浆内,但未到毛细血管外,内皮细胞形态完整;20 min组可见镧渗出到毛细血管外,有内皮细胞穿孔现象,髓鞘完整性出现破坏;30 min组镧颗粒大量渗出到血管外,血管内皮细胞肿胀、破坏,有髓鞘崩解现象和细胞核碎裂。(3)血脑屏障通透性的变化:全脑缺血10 min组、20 min组和30 min组的脑组织中伊文思蓝含量分别为(13.22±5.33)μg/g、(15.58±6.18)μg/g和(16.77±6.87)μg/g,与对照组的(10.47±3.22)μg/g和假手术组的(10.38±4.32)μg/g相比均显著性增高(P<0.05)。结论 (1)短暂性全脑缺血模型成功。(2)全脑缺血早期大鼠大脑皮质和海马CA1区有BBB破坏,并随缺血时间延长而加重。(3)脑缺血早期BBB的破坏或功能性调节参与了脑水肿的形成。更多还原