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EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒载体的构建及鉴定
【作者】 石秦东； 张蓬勃； 康前雁； 陈新林； 田玉梅； 刘建新； 刘勇；
【机构】 西安交通大学医学院神经生物学研究所；
【摘要】 目的构建以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒载体,并对其进行鉴定。方法以pEGFP-N1质粒为模板PCR法扩增获得EGFP基因片段,并将其亚克隆入PGL3-control质粒骨架,得到以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒pEGFP-enhancer。人工合成不同拷贝的缺氧反应元件(HRE)增强子序列,插入到pEGFP-enhancer多克隆位点获得重组质粒pEGFP-HRE,pEGFP-5HR,以脂质体Lipofectamine 2000转染Hela细胞,常氧与缺氧处理后以荧光显微镜及流式细胞仪观察EGFP荧光表达。结果本实验构建的不同拷贝HRE的增强子鉴定质粒pEGFP-HRE,pEGFP-5HRE转染Hela细胞后,常氧处理绿色荧光表达无差距,缺氧处理后随HRE拷贝数增加绿色荧光表达强度增加。结论成功构建了增强子表达质粒pEGFP-enhancer,通过EGFP的表达强度可以反应增强子活性。
- 【会议录名称】 Proceedings of the 7th Biennial Meeting and the 5th Congress of the Chinese Society for Neuroscience
- 【会议名称】中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议
- 【会议时间】2007-10-24
- 【会议地点】中国浙江杭州
- 【分类号】R329
- 【主办单位】中国神经科学学会