Li-Pilocarpine大鼠慢性癫痫模型的建立

【作者】 王晓霞； 王春芳；

【机构】 山西医科大学医学实验中心；

【摘要】 目的探讨Li-Pilocarpine制作慢性大鼠癫痫模型的方法以及模型的鉴定和存活率问题。目前癫痫模型的制作方法有一百多种,其中匹罗卡品癫痫持续状态模型及戊四唑点燃模型是常用的癫痫模型。匹罗卡品癫痫持续状态模型,急性期出现癫痫持续状态后,潜伏期无癫痫发作,慢性期出现癫痫反复自发发作,有文献报道持续至终身发作。从行为学分析,匹罗卡品癫痫持续状态模型更接近人类慢性颞叶癫痫特征,急性期出现脑损伤表现,经过一定潜伏期后,反复出现癫痫自发发作,抗癫痫药物卡马西平、丙戊酸、巴比妥及苯妥英钠等易形成耐药,因此是一种理想的癫痫研究模型。但匹罗卡品的致痫剂量和致死量相近,给模型的制作带来一定的困难。方法模型制作先腹腔注射氯化锂3 mmol/kg,18-20小时后皮下注射匹罗卡品30 mg/kg,在给匹罗卡品前30 min给1 mg/kg的甲基东莨菪碱。模型鉴定根据Racine癫痫分级标准,RacineⅤ级被定为癫痫持续状态,急性期观察到癫痫持续状态认为造模成功;慢性期每天观察4 h,观察到自发性癫痫发作并存活2周左右可认为造模成功。造模成功的大鼠于2周时水和氯醛(0.4 ml/100g)腹腔注射麻醉,打开胸腔,经左心室升主动脉依次用生理盐水500 ml、4%多聚甲醛500 ml心脏灌注,取脑剥离海马,做HE染色和电镜观察。为了提高模型大鼠的存活率,采取了以下措施:在观察到癫痫持续状态后90 min腹腔注射安定5 mg/kg;造模过程中注意大鼠的保暖,保持温暖干燥的环境,室温下独笼饲养;根据情况恰当补充能量(生理盐水、10%葡萄糖等)至动物正常进食为止。结果 Li-Pilocarpine造模成功后,光镜和电镜观察到神经细胞数量减少,部分神经细胞坏死或凋亡,细胞核染色质边集,线粒体肿胀,细胞器崩解,溶酶体增多。大鼠癫痫模型的存活率由公认的20～30%提高到40%。结论 Li-Pilocarpine制作大鼠癫痫模型方法简便,采用"急性期观察到癫痫持续状态;慢性期每天观察4 h,观察到自发性癫痫发作并存活2 week左右"对Li-Pilocarpine慢性癫痫模型进行鉴定的方法是可行的,加强癫痫模型大鼠的护理可提高存活率。更多还原