Licl和Aβ25-35在大鼠神经干细胞分化过程中对tau蛋白磷酸化的影响

【作者】 鄢文海； 郭思； 许燕； 李博； 张秋莹； 韩雪飞； 邢莹；

【机构】 郑州大学基础医学院；

【摘要】 已知tau蛋白作为一种重要的微管相关蛋白在神经系统中广泛分布,但在神经于细胞分化过程中tau蛋白磷酸化的程度及磷酸化的机制尚无报道,为此,我们选用具有代表性的tau]Sp396]、tau[Sp262]抗体和蛋白激酶GSK-3β[pTry279、216],采用免疫细胞化学和蛋白免疫印记技术检测神经干细胞在分化过程中tau蛋白的磷酸化水平和在Licl,Aβ25-35作用下tau蛋白磷酸化的可能机制。在无菌条件下采集新生大鼠的海马齿状回,用无血清"神经球"法朋友神经干细胞,将传至第3代的神经干细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12培育基使其分化7天。将分化中的神经干细胞分成3组,第一组不加Licl和Aβ25-35处理因素;第二组用Licl作用用分化中的神经干细胞24 h,再培育12 h,Licl终浓度为10 mmol/L;第三组用Licl(10 mmol/L)作用于分化中的神经干细胞24后,在用Aβ25-35作用12 h。经过免疫细胞化学和蛋白免疫印记检测发现,在正常处理组中,tau蛋白在Ser396,Ser262位点均有磷酸化表达,GSK-3β[pTry279、216]也呈阳性结果。Licl预处理组tau蛋白在ser396和Ser262位点的磷酸化水平明显下降,GSK-3β[pTry279、216]的表达也明显减少,主要表现为细胞胞浆和轴突染色变浅Aβ组中GSK-3β[pTry279、216]的表达呈阳性结果,tau蛋白在Ser-396和Ser-262位点的也有磷酸化表达。用免疫蛋白印迹检测所得的结果同免疫细胞化学所得的结果一致,这些提示了Aβ25-35作用于Licl预处理的分化中的神经干细胞后使原来表达减弱的GSK-3β[pTry279、216]又重新表达,进而使tau蛋白磷酸化增强。本实验证实了在神经干细胞分化过程中tau蛋白具有一点程度的磷酸化水平,并且Licl可以通过抑制GSK-3β[pTry279、216]活性,降低tau蛋白磷酸化水平而Aβ25-35可以通过激活GSK-3β[pTry279、216]诱导tau蛋白磷酸化。本实验不仅有助研究神经系统的分化生长机制,而且也可以为Alzheimer病提供实验和理论依据。更多还原