小鼠肺癌细胞肿瘤模拟抗原稳定表达株的建立

【作者】 李浩博； 陈帅； 李牧； 李双； 王蕾； 赵培林；

【机构】 同济大学医学院组织胚胎学教研室；

【摘要】 以树突状细胞(dendriticcell,DC)为基础的靶向肿瘤免疫治疗的实验中,建立真核细胞表达的肿瘤模拟抗原重组慢病毒载体三质粒包装系统,构建pHR-CMV-EGFP-OVA和pHRCMV-EGFP两个慢病毒载体;将所构建的质粒载体转入小鼠Lewis肺癌细胞中,并建立其稳定表达的细胞株。方法:将相关4个质粒分别转化DH5α感受态细胞,扩增、纯化并检测;用脂质体法将三质粒共转染人胚肾293T细胞,收集包装产生的含病毒上清。经鉴定并浓缩后,转导小鼠Lewis肺癌细胞(LLC),同时应用polybrene(8μg/m1),转导效率达60%。在无菌环境中,荧光显微镜下,吸取单细胞并培养扩增,克隆化筛选出能够稳定表达OVA的单克隆细胞株。结果显示本研究建立了具有良好转导活性的pHR-CMV-EGFP-OVA和pHR-CMV-EGFP两个慢病毒载体的三质粒包装细胞系统,并分别筛选纯化得到了稳定表达OVA肿瘤模拟抗原和绿色荧光蛋白的LLC细胞株。实验结果解决了体外实验中采用模拟肿瘤抗原对靶细胞基因修饰的问题,同时为下一步DC的转导提供了可靠数据和实验依据。更多还原