L-NAT对PHN细胞缺血/缺氧损伤的保护作用及其机制研究

【作者】 于树娜； 史才兴； 赵世福； 赵金岭； 蒋吉英；

【机构】 潍坊医学院；

【摘要】 为探讨N-乙酰-L-色氨酸（L-NAT）对PHN细胞缺血/缺氧损伤的保护作用,本研究用H₂O₂诱导PHN制备海马神经元氧化应激损伤的细胞模型,观察活化型Caspase-3的表达,细胞存活率、线粒体跨膜势能及凋亡诱导因子（AIF）和细胞色素C（Cytc）等促凋亡因子的改变。（1）镜下观察:与对照组相比,H₂O₂诱导后,神经元细胞膜变圆,胞体肿胀,细胞失去原有形态,突起减少或消失;与H₂O₂组相比,L-NAT组神经元的胞体较完整,大部分细胞存在少量的突起,突起的数量较正常组减少。（2）台盼蓝染色显示,对照组可见少量的台盼蓝阳性细胞,H₂O₂诱导后,出现大量的阳性细胞,L-NAT干预后,阳性细胞的数量降低,L-NAT组细胞的存活率明显高于H₂O₂组。（3）免疫荧光染色和免疫印迹结果显示,激活的Caspase-3在H₂O₂组的表达较L-NAT组高。（4）Rh123染色显示线粒体膜势能（△Ψm）的改变,对照组阳性产物呈点状或颗粒状分布于胞浆中,H₂O₂组阳性反应减弱,阳性产物呈弥散性分布;L-NAT可使部分细胞恢复颗粒状分布的特点。（5）Western blot结果显示,Cytc和AIF在对照组组线粒体中的表达较高;在H₂O₂组由于其向胞浆的释放,使其在线粒体中的量降低,而在胞浆中的表达增高;L-NAT可减轻这一改变。上述结果表明,L-NAT可抑制线粒体膜势能的丧失、通过抑制Caspase依赖性和非依赖性的细胞凋亡途径,对缺血再灌注损伤的神经细胞产生保护作用。更多还原