合浦珠母贝两种组织蛋白酶L序列分析与组织表达

【作者】 麻建军； 张殿昌； 姜晶晶； 蒲含林； 江世贵；

【机构】 中国水产科学研究院南海水产研究所水产养殖与生物技术重点实验室； 暨南大学生物工程研究所；

【摘要】 合浦珠母贝是我国珍珠培育的重要经济贝类。组织蛋白酶L是一组重要的半胱氨酸蛋白酶,广泛参与各种有机体的激素原激活、抗原呈递、组织器官发育。利用本实验室构建的合浦珠母贝EST文库,测序获得两个组织蛋白酶L全长cDNA序列,命名为poCL1和poCL2。poCL1 cDNA全长1160bp,其开放阅读框长993bp,编码由331个氨基酸残基组成的前肽原,分子量为37.1道尔顿,等电点为6.0,推测其信号肽长度为16个氨基酸,无功能前区长度为97个氨基酸,成熟肽由218个氨基酸残基组成。poCL2 cDNA全长1094bp,其开放阅读框长990bp,编码由330个氨基酸残基组成的前肽原,分子量为37.0道尔顿,等电点为6.9,推测其信号肽长度为16个氨基酸,无功能前区长度为97个氨基酸,成熟肽由219个氨基酸残基组成。poCL1前肽原含有1个N糖基化位点(Asn₉₈),4个催化活性位点(Gln₁₃₂,Cys₁₃₈,His₂₇₈,Asn₂₉₈),6个底物结合位点(Leu₁₈₂,Me_t183,Ala₂₄₉,Leu₂₇₆,As_n279,Cys₃₂₅),具有2个典型的组织蛋白酶L保守结构域ERFNIN（ERWNIN）、GNFD（GNYD）。poCL2前肽原含有1个N糖基化位点(Asn₉₇),4个催化活性位点(Gln₁₃₂,Cys₁₃₈,His₂₇₇,Asn₂₉₇),6个底物结合位点(Leu₁₈₂,Met₁₈₃,Ala₂₄₉,Leu₂₇₅,Asn₂₇₈,Cys₃₂₄),具有2个典型的组织蛋白酶L保守结构域ERFNIN（ERWNIN）、GNFD（GNYD）。BLAST分析表明poCL1和poCL2相似性和同源性分别为77.9%,65.7%;poCL1与其他物种比对,相似性介于62.5-72.5%之间,同源性介于42.9-56.0%之间。系统进化分析表明,poCL1和poCL2与无脊椎动物聚为一支,与海参,海胆,蜗牛亲缘关系较近。poCL1和poCL2 mRNA表达水平研究表明,两种组织蛋白酶L在消化腺,性腺、血淋巴、鳃、外套膜、肠、闭壳肌中都表达,其中在消化腺中表达量最高,其他组织中表达量较低。poCL1在消化腺、性腺、血淋巴、外套膜、肠中表达量高于poCL2,在鳃中表达量低于poCL2,在闭壳肌中两者表达量几乎相等。这些结果为探索组织蛋白酶L在合浦珠母贝主动免疫反应中的作用提供了重要信息。更多还原