泥螺(Bullacta exarata Philippi 1848)微卫星标记的筛选

【作者】 杜慧霞； 孙鲁阳； 彭薇； 胡景杰； 包振民；

【机构】 中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室； 中国海洋大学海洋生命学院；

【摘要】 泥螺（Bullacta exarata Philippi,1848）属于软体动物门、腹足纲、头楯目、阿地螺科,广泛分布于日本和朝鲜沿海,以及我国沿海的潮间带滩涂。2007年,国家海洋局对生态监控区进行的生态监测显示,2001年从江苏引种的泥螺成为莱州湾入侵种,分布范围逐年扩大,目前超过80%的潮间带滩涂均有泥螺分布。本研究通过对泥螺进行微卫星标记开发,以期为研究泥螺种群遗传结构和遗传多样性,以及制定科学的管理政策提供有力工具。实验采用微卫星富集文库-菌落原位杂交法,利用固定有（AG）₁₅和（AC）₁₅的尼龙膜（Hybond N⁺）捕捉含有微卫星的片段,构建泥螺的微卫星富集文库。以DIG标记的（AG）₁₅和（AC）₁₅为探针进行菌落原位杂交扫描富集文库,阳性克隆测序获得微卫星DNA。源于富集文库中的112个重组克隆经过菌落原位杂交后,将得到的38个（33.93%）阳性克隆全部送测。测序结果显示35（92.11%）个克隆含有至少一个微卫星位点。选取34个位点设计引物,16个位点可扩增出有多态性的目的片段。等位基因数目为2-13个不等,观测杂合度（H_o）和期望杂合度（H_e）的范围分别为0.5106-0.8125和0.4868-0.9208,经检验1个位点偏离Hardy-Weinberg平衡。这些标记可以为生物入侵研究,贝类群体遗传学分析,遗传图谱构建,种质鉴定,生物生态和进化等提供理论依据。更多还原