抑制Ddit4基因表达对甲基苯丙胺诱导PC12细胞自噬的影响

【作者】 陈玲； 李兵； 艾修云； 台运春； 黄恩平； 谢卫兵； 王慧君；

【机构】 南方医科大学基础医学院法医学系；

【摘要】 目的探讨抑制Ddit4基因表达对甲基苯丙胺（methamphetamine,METH）诱导PC12细胞自噬的影响。方法分别用浓度0、1.0、2.0、2.5、3、3.5 mmol·L^-1的METH处理PC12细胞24h,Western Blot检测Ddit4、PmTOR和自噬相关蛋白LC3-II的表达变化。设计3对特异性siRNA靶序列转染PC12细胞,实时荧光定量PCR和Western Blot分别检测Ddit4基因在mRNA和蛋白水平的沉默效率。以干扰效率最佳的细胞为siRNA组,实验分为对照组,siRNA组,对照+METH组,siRNA+METH组,Western Blot检测p-mTOR和自噬相关蛋白LC3-II的表达变化。结果以0 mmol·L^-1为对照组,随着METH浓度的增加,Ddit4和自噬相关蛋白LC3-II的表达量均显著性上升（P<0.001）,p-mTOR的表达量显著下降。QPCR和Western Blot结果显示,siRNA-A能有效降低PC12细胞中Ddit4 mRNA和蛋白的表达量。Western Blot结果显示siRNA+METH组与对照+METH组相比,p-mTOR的表达量显著提高（P<0.001）,LC3-II的表达量显著下降（P<0.001）。结论 METH能够刺激细胞中Ddit4蛋白的高表达,抑制p-mTOR,诱导细胞自噬,敲低Ddit4基因的表达能够激活p-mTOR,从而控制METH诱导的细胞自噬。更多还原