氢醌诱导小鼠卵黄囊造血干细胞氧化应激过程中PKM2的作用

【作者】 朱洁； 熊北斗； 王巍； 李真； 李超； 王丽萍； 白玉娥； 张少尊； 范宁娜； 周胜； 王红； 毕勇毅；

【机构】 武汉大学医学部公共卫生学院湖北过敏与免疫相关疾病重点实验室/湖北生物质资源化学与环境生物技术重点实验室；

【摘要】 目的观察氢醌(HQ)导致的氧化应激与PKM2蛋白表达的联系,进而了解ROS与PKM2的表达在苯致白血病中的作用,为预防和治疗苯导致的血液中毒提供新的依据。方法颈椎脱臼8～10 d昆明孕鼠取其卵黄囊,运用淋巴分离液及免疫磁珠法分(MACS)选出小鼠卵黄囊胚胎造血干细胞,种板于七种不同浓度氢醌的无血清培养基中染毒6 h完成各种实验,流式细胞仪检测ROS的产生,real-time PCR检测Nrf2及其靶基因NQ01,GCLM/GCLC和HMOX-1的mRNA表达,Western blotting检测PKM2,Nrf2,Nqo1和hmox-1以及细胞内过氧化物酶、超氧化物歧化酶的蛋白表达。结果流式细胞仪检测ROS结果显示随着氢醌浓度升高,小鼠卵黄囊造血干细胞内ROS水平逐渐增加。real-time PCR结果显示随着氢醌浓度增加,Nrf2及其靶基因NQ01,GCI-M/GCLC和HMOX-1的mRNA表达升高。Western blotting结果显示随着氢醌浓度升高,小鼠卵黄囊造血干细胞中PKM2的表达逐渐降低,Nrf2及其靶基因NQ01和HMOX-1表达逐渐升高。细胞内过氧化物酶、超氧化物歧化酶随着氢醌浓度的升高逐渐降低。结论 HQ可诱导ROS的产生,并抑制PKM2蛋白的表达,而Nrf2靶基因NQ01,GCL-M/GCLC和HMOX-1的表达增加。NADPH1氧化酶的表达也相应地增多。细胞内过氧化物酶、超氧化物歧化酶的表达明显受到抑制。更多还原