应用RNA干扰技术研究人支气管上皮细胞中5-脂氧合酶介导4-氨基联苯氧化活化与DNA损伤

【作者】 武越； 朱宏翔； 黄云； 王静； 胡建安；

【机构】 中南大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系； 湖南省职业病防治院控制评价科；

【摘要】 目的采用RNA干扰技术研究人支气管上皮(HBE)细胞中5-脂氧合酶(5-LOX)介导4-氨基联苯(4-ABP)氧化活化与DNA损伤,进一步为LOX作为介导前致癌物氧化活化的代谢途径提供更有效证据,并为利用LOX siRNA沉默LOX发挥防治间接致癌物的致癌作用提供新线索。方法用4-ABP分别染毒正常HBE细胞、载体对照(NC)细胞和经5-LOXshRNA处理细胞24 h,通过MTT实验检测4-ABP对各组细胞存活率的影响;用Western blot检测各组细胞5-LOX蛋白表达;用单细胞凝胶电泳实验检测各组的DNA损伤情况。比较4-ABP染毒对5-LOXshRNA细胞组与经特异性5-LOX抑制剂AA861处理组的细胞毒性和DNA损伤情况。结果正常HBE组、NC组经4-ABP染毒24 h后,每组随着4-ABP浓度的增加,吸光度逐渐下降,细胞存活率降低,各浓度组间差异有统计学意义(P<0.05);相同染毒浓度下5-LOXshRNA处理组比NC组的细胞存活率高,特异性5-LOX抑制剂AA861组比阴性对照组细胞存活率高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。4-ABP染毒均可以使正常HBE组、NC组和5-LOXshRNA处理组的5-LOX蛋白表达增加;加入AA861对5-LOX蛋白表达基本没有影响。经4-ABP染毒后彗星细胞阳性率增加,彗星图像尾部长度增长,尾距变大;正常HBE组经shRNA处理或加入抑制剂AA861后,彗星细胞阳性率下降,彗尾长度变短,且shRNA处理组变化更明显。结论 5-LOXshRNA和特异性5-LOX抑制剂AA861均可以抑制4-ABP引起的细胞毒性和DNA损伤,5-LOXshRNA抑制效果更为显著,更有效表明5-LOX参与了HBE细胞中4-ABP的氧化活化,可能与后者的致癌作用有关,提示LOX siRNA沉默LOXRNA干扰技术可能有利于作为4-ABP致癌作用防治的线索。更多还原